วิธีการเตรียมสต็อกกลีเซอรอล: 9 ขั้นตอน (พร้อมรูปภาพ)

สารบัญ:

วิธีการเตรียมสต็อกกลีเซอรอล: 9 ขั้นตอน (พร้อมรูปภาพ)
วิธีการเตรียมสต็อกกลีเซอรอล: 9 ขั้นตอน (พร้อมรูปภาพ)

วีดีโอ: วิธีการเตรียมสต็อกกลีเซอรอล: 9 ขั้นตอน (พร้อมรูปภาพ)

วีดีโอ: วิธีการเตรียมสต็อกกลีเซอรอล: 9 ขั้นตอน (พร้อมรูปภาพ)
วีดีโอ: How To Set Up MLA Format In Microsoft Word *2021* 2024, มีนาคม
Anonim

สต็อกกลีเซอรอลเป็นสารแขวนลอยชนิดหนึ่งที่ใช้ในห้องปฏิบัติการเพื่อเก็บการเพาะเชื้อแบคทีเรียเป็นระยะเวลานาน เมื่อเพิ่มวัฒนธรรมแบคทีเรียเหลวลงในสารละลายกลีเซอรอล 50% กลีเซอรอลจะซึมซาบเข้าสู่เซลล์แบคทีเรีย ทำให้โครงสร้างมีเสถียรภาพและจัดเก็บได้อย่างปลอดภัย หลังจากผสมตัวอย่างของคุณแล้ว ให้แช่แข็งตัวอย่างที่ −80 °C (−112 °F) เพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างจะยังคงใช้งานได้นานที่สุด

ขั้นตอน

ส่วนที่ 1 จาก 3: การผสมสารละลายกลีเซอรอล

เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 1
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 1

ขั้นตอนที่ 1 เตรียมการเพาะเชื้อของเหลวของแบคทีเรียที่คุณต้องการเก็บ

เพื่อให้สต็อกกลีเซอรอลมีประสิทธิภาพ จะต้องรวมกับการเพาะเชื้อแบคทีเรียเหลว การผลิตอาหารเหลวจะทำให้คุณต้องฟักตัวอย่างแบคทีเรียในชั่วข้ามคืนในขวดรูปชมพู่ที่เติมน้ำซุปไลโซจีนีและความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่ถูกต้อง

  • เมื่อคุณเตรียมการเพาะเลี้ยงของเหลวแล้ว คุณสามารถเก็บแบคทีเรียในการจัดเก็บหรือแยก DNA พลาสมิดออก
  • Lysogeny broth (เรียกอีกอย่างว่า "LB broth" และ "LB liquid") เป็นของเหลวที่อุดมด้วยสารอาหารชนิดหนึ่งที่ใช้ในการแพร่เชื้อแบคทีเรียอย่างรวดเร็ว สามารถซื้อได้จากร้านค้าปลีกที่ขายอุปกรณ์และวัสดุในห้องปฏิบัติการ
  • การเพาะเลี้ยงเชื้อแบคทีเรียเป็นกระบวนการทางเทคนิคขั้นสูงที่เกี่ยวข้องกับตัวแปรต่างๆ มากมาย ด้วยเหตุนี้ จึงควรดำเนินการโดยช่างเทคนิคที่ผ่านการฝึกอบรมในห้องปฏิบัติการที่มีการควบคุม
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 2
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 2

ขั้นตอนที่ 2 เจือจางกลีเซอรอลบริสุทธิ์ในน้ำกลั่นเพื่อสร้างสารละลายกลีเซอรอล 50%

ใช้ปิเปตปลอดเชื้อเพื่อตวงของเหลวทั้งสอง 10 มล. และผสมให้เข้ากันในขวดเดียว คนหรือเขย่าขวดให้ละเอียดจนของเหลวผสมเข้ากัน

  • การเจือจางกลีเซอรอลเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อป้องกันไม่ให้เซลล์แบคทีเรียเสียหาย
  • นักวิทยาศาสตร์บางคนชอบที่จะใช้สารละลายกลีเซอรอลให้ต่ำเพียง 15-40% เพื่อหลีกเลี่ยงไม่ให้เกิดการเพาะเชื้อแบคทีเรีย อย่างไรก็ตาม ส่วนผสม 50% จะให้อายุการเก็บรักษาที่ยาวนานที่สุด
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 3
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 3

ขั้นตอนที่ 3 ถ่ายโอน 50 ไมโครลิตรของสารละลายกลีเซอรอล 50% ไปยังหลอดไมโครฟิวจ์

ย้ายกลีเซอรอลที่เจือจางไปยังขวดใหม่อย่างระมัดระวังเพื่อหลีกเลี่ยงการหก คุณจะใช้ภาชนะเดียวกันนี้เพื่อใส่สารละลายกลีเซอรอลกับแบคทีเรียที่เป็นของเหลว และวางตัวอย่างลงในห้องเย็น

ถ้าเป็นไปได้ ให้ใช้ท่อที่มีฝาเกลียว แทนที่จะใช้ท่อแบบมีปุ่มปิด เป็นที่ทราบกันว่าหลอดสแน็ปด้านบนเปิดโดยไม่ได้ตั้งใจระหว่างการผสมและการเก็บรักษาเป็นเวลานาน

ส่วนที่ 2 จาก 3: การเพิ่มวัฒนธรรมแบคทีเรีย

เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 4
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 4

ขั้นตอนที่ 1 เพิ่ม 50 ไมโครลิตรของวัฒนธรรมแบคทีเรียเหลวของคุณลงในสารละลาย

ใช้ปิเปตสดในการวัดปริมาณที่เท่ากันของการเพาะเลี้ยงของเหลว และเทลงในสารละลายกลีเซอรอลในหลอดโดยตรง สัดส่วนสุดท้ายของสต็อกกลีเซอรอลของคุณควรเป็นแบคทีเรีย 50% และกลีเซอรอลเจือจาง 50%

  • การใช้กลีเซอรอลและการเพาะเลี้ยงของเหลวในปริมาณที่ไม่สมส่วนอาจส่งผลต่อความแข็งแกร่งของแบคทีเรีย และลดระยะเวลาที่สามารถอยู่รอดได้ในห้องเย็น
  • หากคุณกำลังใช้สารละลายกลีเซอรอลที่มีความเข้มข้นต่ำกว่า คุณจะต้องปรับปริมาณการเพาะเชื้อแบคทีเรียตามลำดับ ศึกษาเอกสารที่เกี่ยวข้องกับความเครียดที่คุณจัดเก็บสำหรับข้อมูลเพิ่มเติม
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 5
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 5

ขั้นตอนที่ 2. วางฝาบนหลอด

ขันฝาให้เข้าที่ หรือกดลงจนได้ยินเสียงคลิกเบาๆ หากคุณใช้ท่อแบบ snap-top ตรวจสอบให้แน่ใจว่าฝาปิดแน่นดีแล้วก่อนดำเนินการต่อ

เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 6
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 6

ขั้นตอนที่ 3 เขย่าหลอดเบา ๆ เพื่อผสมแบคทีเรียและกลีเซอรอล

ปัดหลอดไปมาสองสามครั้งจนของเหลวทั้งสองกระจายตัวเท่ากัน ณ จุดนี้ เซลล์แบคทีเรียจะค่อยๆ เริ่มดูดซับสารละลายกลีเซอรอล ซึ่งจะทำให้เสถียรภาพและปกป้องเยื่อหุ้มเซลล์จากการเสื่อมสภาพและความเสียหายที่เกี่ยวข้องกับอุณหภูมิ

กดนิ้วโป้งของคุณกับฝาของหลอดไมโครฟิวจ์อย่างแน่นหนาขณะเขย่าเพื่อให้แน่ใจว่าจะไม่หลุดออกมา

ส่วนที่ 3 ของ 3: การจัดเก็บและฟื้นฟูวัฒนธรรมแบคทีเรีย

เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่7
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่7

ขั้นตอนที่ 1. ติดฉลากตัวอย่างแบคทีเรีย

เขียนชื่อของวัฒนธรรมบนฉลากหลอดทดลองขนาดเล็กหรือแถบเทปกาว แล้วติดเข้ากับหลอดไมโครฟิวจ์ในที่ซึ่งมองเห็นได้ชัดเจน คุณยังสามารถจดข้อมูลการจำแนกประเภทของแบคทีเรียลงบนฝาได้โดยตรงโดยใช้ปากกามาร์คเกอร์แบบสักหลาด

  • อย่าลืมบันทึกข้อมูลอื่นๆ ที่อาจเป็นประโยชน์ระหว่างการวิเคราะห์ เช่น สายพันธุ์ที่แน่นอนของตัวอย่างหรือที่มาของตัวอย่าง
  • การติดฉลากคอนเทนเนอร์ตัวอย่างของคุณเป็นขั้นตอนที่ขาดไม่ได้ในกระบวนการรวบรวม เนื่องจากช่วยให้คุณสามารถติดตามเนื้อหาในคอนเทนเนอร์ขณะที่สับเปลี่ยนเข้าและออกจากที่จัดเก็บ
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 8
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 8

ขั้นตอนที่ 2 แช่แข็งตัวอย่างที่อุณหภูมิ −80 °C (−112 °F)

วางตัวอย่างที่ติดฉลากไว้ในตู้แช่แข็งในห้องปฏิบัติการที่เย็นมาก โดยตั้งอุณหภูมิคงที่ที่ −80 °C (−112 °F) เมื่ออยู่ภายใต้สภาวะเหล่านี้ การเพาะเลี้ยงแบคทีเรียจะคงอยู่ได้นานหลายปี

สิ่งสำคัญคืออุณหภูมิของช่องแช่แข็งจะต้องคงที่ที่ −80 °C (−112 °F) หากถูกทำให้อุ่นขึ้น แบคทีเรียที่เก็บรักษาไว้อาจตายได้

เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 9
เตรียมกลีเซอรอลสต็อค ขั้นตอนที่ 9

ขั้นตอนที่ 3 ขูดแบคทีเรียแช่แข็งจำนวนเล็กน้อยเพื่อเตรียมสำหรับการวิเคราะห์

เมื่อถึงเวลาชุบชีวิตตัวอย่างของคุณ ให้นำหลอดไมโครฟิวจ์ออกจากช่องแช่แข็งแล้วเปิดฝา ใช้ห่วงเพาะเชื้อ ไม้จิ้มฟัน หรือปลายปิเปตเพื่อเก็บวัสดุแช่แข็งจำนวนเล็กน้อยจากด้านบนของตัวอย่างและนำแบคทีเรียไปวางบนจานวุ้น LB เพื่อทำการตรวจสอบหรือทดสอบ

  • ระวังอย่าให้แบคทีเรียขูดละลาย การเก็บหลอดสต็อกไว้บนน้ำแข็งแห้งอาจช่วยได้จนกว่าคุณจะทำการทดสอบเสร็จ
  • ดึงตัวอย่างของคุณออกจากช่องแช่แข็งเมื่อจำเป็นเท่านั้น การละลายและการแช่แข็งซ้ำๆ จะทำให้อายุการใช้งานลดลงอย่างมาก

แนะนำ: